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白藜芦醇对大鼠海马CA1区诱发癫痫样活动的抑制作用

【摘要】:目的 本研究采用正常大鼠海马脑片灌流离子型γ-氨基丁酸受体(GABAA受体)拮抗剂荷包牡丹碱(bicuculline,Bic)引起癫痫样活动;以及应用脑立体定位技术在大鼠海马CA3中心区通过微量注射海人草酸(Kainic acid,KA)来建立颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠模型。采用离体脑片细胞外场电位记录方法观测不同浓度白藜芦醇(resveratrol, Res)对癫痫大鼠海马CA1区场电位的影响,为临床研发抗癫痫新药提供理论依据。 方法 1模型建立 1.1颞叶癫痫模型Wistar雄性大鼠,体重200~240克,清洁级。大鼠经水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉后,固定于立体定位仪上,在右侧海马CA3中心区(AP:–4.0mm,ML:4.4mm, DV:3.8mm)用微量注射针注入2.5~3μl KA(0.4μg/μl),注射15min,留针10min,术后缝合头皮。大鼠急性发作等级参照Racine标准分级,达到Ⅳ级及以上视为建模成功,模型大鼠在手术后2~4周进行细胞外场电位记录。 1.2急性癫痫样活动正常大鼠离体海马脑片灌流GABAA受体拮抗剂Bic(30μmol/L)以引起癫痫样活动。 2离体脑片制备大鼠用2%戊巴比妥钠麻醉后迅速断头取脑,置于持续给予95%O2和5%CO2混合气的4℃人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)中。待脑组织冷却后沿海马槽纤维走向切成400μm厚的脑片,并将其移至含ACSF(30±2℃)的孵育槽中,持续通入混合气,孵育1~2h。 3场电位记录将孵育的脑片移至记录槽,持续灌流95%O2和5%CO2混合气饱和的ACSF,灌流速度2ml/min,温度32℃。刺激海马辐射层Schaffer侧支通路,在CA1区锥体细胞层记录群峰电位(population spike, PS)。 4统计学分析采用SPSS13.0统计软件分析。实验结果以x±SEM表示,组间均数用t检验进行比较,P 0.05具有统计学意义。 结果 1. Res对正常大鼠海马CA1区PS的影响电刺激离体海马脑片Schaffer侧支,在CA1区锥体细胞层通常可记录到单个PS,在灌流正常脑片的ACSF中分别加入低、中和高剂量的Res(分别为5μmol/L、15μmol/L和50μmol/L),当含有相应浓度Res的ACSF灌流脑片后,记录的PS幅度均无明显变化(n=8, P﹥0.05)。 2. Res对大鼠海马CA1区诱发癫痫样放电的影响大鼠海马CA1区癫痫样放电的形成可通过脑片急性灌流含Bic的ACSF或在体海马脑区注射KA诱发TLE。灌流含Bic(30μmol/L)的ACSF20min后,记录到的场电位为多个PS的痫样电位,再分别灌流添加低、中剂量Res(5、15μmol/L)的ACSF后,前4个PS幅度均无明显变化(分别为n=8, P﹥0.05;n=8, P﹥0.05);灌流添加高剂量Res(50μmol/L)的ACSF后,前4个PS幅度均出现显著性降低,(n=8, P﹤0.01),并且PS数目也明显减少,为灌流前的82.02±1.3%(n=8, P﹤0.01)。在TLE模型大鼠海马脑片上记录到的场电位为多个PS的痫样电位,分别灌流含低、中剂量Res(5、15μmol/L)的ACSF后,前4个PS幅度均无明显变化(分别为n=6, P﹥0.05;n=6, P﹥0.05);灌流含高剂量Res(50μmol/L)的ACSF后,前4个PS幅度均出现显著性降低(n=6, P﹤0.01),PS数目也明显减少,为灌流前的84.58±2.4%(n=6, P﹤0.01)。 结论 1.低、中、高剂量的Res (5μmol/L,15μmol/L和50μmol/L)对正常大鼠海马CA1区的PS没有明显的影响。 2.低、中剂量的Res (5μmol/L和15μmol/L)的对大鼠海马CA1区诱发的癫痫样放电活动没有明显的影响,而高剂量的Res (50μmol/L)对大鼠海马CA1区诱发的癫痫样放电活动有部分抑制作用。

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